г.Москва
на сайт ВНИИЗЖ
Питательные среды - один из основных компонентов микробиологических исследований. Их качество во многом определяет информативность и точность микробиологического анализа. О стерилизации питательных сред рассказали специалисты Тульской испытательной лаборатории подведомственного Россельхознадзору ФГБУ ЦНМВЛ.
Питательные среды стерилизуют при различных режимах. Термолабильные компоненты стерилизуют методом фильтрования и вносят в простерилизованную основную среду. Стерилизация сред, имеющих значения рН, отличающихся от нейтральных, нежелательна, так как в этих условиях происходят их необратимые изменения (гидролиз полимерных соединений, карамелизация углеводов, др). Поэтому среды рекомендуется стерилизовать при нейтральном значении рН до нужного значения, а после доводить рН до нужного значения с помощью стерильного раствора кислоты или щелочи.
Наиболее часто используют стерилизацию паром под давлением при температуре около 121⁰С, строго контролируя режим стерилизации для того чтобы избежать термической денатурации компонентов питательной среды или нежелательного взаимодействия с образованием токсичных продуктов. Короткий период воздействия высокой температуры вызывает меньшую химическую деградацию среды, чем длительное прогревание при низкой температуре.
Оптимизация процесса требует контроля периода нагрева и охлаждения автоклава. Цикл стерилизации может быть разделен на 4 стадии:
- время нагрева стерилизационной камеры с 20 до 121⁰С,
- время прогрева массы стерилизуемой среды от <100 до 121⁰С,
- время выдержки при 121⁰С,
- время охлаждения от 121 до 80⁰С
Прогрев питательных сред обычно сопровождается изменением рН, потемнением, образованием осадка, ослаблением прочности геля и ухудшением биологических свойств среды.
Перед стерилизацией все компоненты среды должны быть растворены, агаровые среды следует стерилизовать сразу после расплавления агара, не давая ему застыть. Нежелательно выдерживать расплавленные среды при 50⁰С на водяной бане более 3 часов перед использованием. Агаровые среды с рН ≤5,0 очень чувствительны к перегреву, поскольку агар гидролизуется и гель теряет прочность. Нежелательно готовить большие объемы (более 2 л) питательных сред, так как в больших объемах возникает возможность локального перегрева. После стерилизации среды следует как можно быстрее охладить до комнатной температуры, защищая их от прямого солнечного света.
