г.Москва
на сайт ВНИИЗЖ
Питательные среды являются основным компонентом микробиологических и бактериологических исследований и используются для выделения, транспортировки, культивирования, идентификации и дифференциации микроорганизмов. Получаемые результаты зависят от качества сред, стабильности их свойств.
История появления первых питательных сред уходит во времена Роберта Коха, который активно использовал питательные среды в собственных исследованиях. В современной микробиологии существует несколько тысяч прописей (с учетом модификаций) питательных сред. Многие из них стали «классическими», например, среды Эндо и Плоскирева для выявления энтеробактерий, в том числе бактерий рода Salmonella, среда Китт-Тароцци - для анаэробов, среды Чапека и Сабуро - для культивирования дрожжеподобных и мицелиальных грибов.
Различные серии сред, приготовленные даже по одному и тому же рецепту, могут различаться по питательной ценности или другим свойствам. В связи с этим питательные среды, как производственные, так и приготовленные в лаборатории, должны подвергаться внутрилабораторному контролю.
Для проведения внутрилабораторного контроля качества питательных сред можно использовать следующие нормативные документы:
- ГОСТ Р 51758-2001 Среды питательные для ветеринарных целей. Методы биологических испытаний.
- МУ 2.1.4.1057-01 Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды
- МУК 4.2.2316-08 Методы контроля бактериологических питательных сред и др.
На базе ФГБУ ЦНМВЛ были разработаны «Рекомендации по организации и проведению контроля качества питательных сред для ветеринарных лабораторий», которые являются действующими, и на основании которых сотрудники отдела бактериологии проводят внутрилабораторный контроль качества питательных сред.
Контроль качества питательных сред должен осуществляться высококвалифицированными специалистами на всех этапах технологического процесса, начиная с момента закупки среды до непосредственного использования в анализе, и включать следующие этапы:
1. Проверку документации и визуальный контроль питательных сред при их получении.
2. Контроль условий и сроков хранения питательных сред.
3. Контроль питательных сред на этапе приготовления.
4. Контроль биологических свойств питательных сред.
Применение питательных сред без подтверждения их качества не допускается!
Контроль качества должен проводиться с использованием только эталонных штаммов, из официально признанной коллекции микроорганизмов.
Культуру тестового штамма готовят накануне исследования. Для этого ее высевают со среды хранения (например, с полужидкого агара) на пробирки со скошенным питательным агаром или специальной средой.
В лаборатории должен осуществляться качественный и количественный контроль качества питательных сред.
Качественный контроль основан на оценке характера роста тестовых культур. Для этого суточную агаровую культуру тестового штамма пересевают в контролируемые питательные среды. Среду считают пригодной, если по истечении срока инкубации тестовый штамм дает хорошо различимый рост со всеми типичными для него признаками, которые предполагается выявлять на данной среде.
Количественный контроль питательных сред проводится по следующим показателям:
- Влияние питательной среды на типичность микроорганизмов - оценку проводят по культурально - морфологическим и биохимическим признакам;
- Ингибирующие свойства среды - оценивают как степень подавления прочей микрофлоры по величине посевной дозы в КОЕ (колониеобразующие единицы), полностью подавляемой на среде, или по отношению количества выросших колоний бактерий к расчетному количеству посеянных бактерий, а также величиной отношения среднего числа сформировавшихся колоний тест-штамма на "неингибиторной" среде (среда выращивания) к среднему числу колоний на испытуемой "ингибиторной" среде (показатель ингибиции) с учетом разведения;
- Эффективность среды - выход микробных клеток из 1 мл питательной среды (в млрд./мл) и прирост числа микроорганизмов относительно засеянного (показатель эффективности);
- Показатель чувствительности среды - максимальное разведение культуры, обеспечивающее визуально обнаруживаемый рост колоний искомого штамма при культивировании в течение определенного времени и определенной температуре на всех засеянных чашках (пробирках) с питательной средой.
Внутрилабораторный контроль качества питательных сред обеспечивает гарантию достоверных результатов.
